布病抗體檢測(cè)試劑盒(試管凝集法)

布病抗體檢測(cè)試劑盒(試管凝集法)說(shuō)明說(shuō)

【產(chǎn)品名稱(chēng)】

通用名稱(chēng)：布病抗體檢測(cè)試劑盒(試管凝集法)

【包裝規(guī)格】                        

12ml/瓶

【預(yù)期用途】

布病抗體檢測(cè)試劑盒(試管凝集法)

本品用于體外定性檢測(cè)人血清樣本中布魯氏菌抗體，檢測(cè)結(jié)果僅用于科研學(xué)術(shù)參考，不能作為臨床診斷依據(jù)。布魯氏菌病是由布魯氏菌屬細(xì)菌引起的人畜共患的傳染病。布魯氏菌具有很強(qiáng)的侵襲力和擴(kuò)散力，當(dāng)人與牲畜及其污染物接觸過(guò)程中，可以經(jīng)過(guò)皮膚、消化道、呼吸道黏膜等侵入人體。布魯氏菌抗體的產(chǎn)生始于感染后的2-3周。血液中產(chǎn)生的抗體可反映出感染的發(fā)生及發(fā)展過(guò)程，因此檢查血液中布魯氏菌抗體對(duì)了解布魯氏菌病的感染、發(fā)病、治愈等具有一定的意義。

布魯氏菌病試管凝集試驗(yàn)（SAT）是比較穩(wěn)定、特異且較敏感的1種血清學(xué)方法，可以檢測(cè)人與動(dòng)物血清中的抗布魯氏菌 IgG、IgM和 IgA三類(lèi)免疫球蛋白抗體，但主要檢測(cè)的是 IgM和 IgG型抗體，且 SAT檢測(cè)IgM的敏感性顯著高于IgG，因此可作為人與動(dòng)物感染布魯氏菌病的早期診斷；同時(shí)也可用于布魯氏菌疫苗免疫后機(jī)體抗體水平的檢測(cè)；若進(jìn)行多次SAT，血清中凝集價(jià)不斷上升則診斷意義更大。在實(shí)際應(yīng)用中SAT常用作布病普查的復(fù)檢與確證。

【檢驗(yàn)原理】

在37℃條件下，適宜濃度的菌體抗原可充分反應(yīng)結(jié)合血清樣本中布魯氏菌抗體，反應(yīng)結(jié)束后，根據(jù)其凝集程度可以判定血清樣本中布魯氏菌抗體滴度的高低。

【主要組成成分及性狀】

本品為乳白色液體，長(zhǎng)時(shí)間靜置后瓶底可見(jiàn)白色沉淀，震搖后為均勻懸浮液。試劑的主要成分是經(jīng)加熱滅活的布魯氏菌牛型 104M株菌體，菌體懸于含 5g/L的生理鹽水中。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

于 2～ 8℃下保存，有效期24個(gè)月。

試劑反復(fù)多次開(kāi)瓶使用后，6個(gè)月內(nèi)試劑性能不發(fā)生變化。  

生產(chǎn)日期、有效期至：見(jiàn)標(biāo)簽。

【 運(yùn) 輸 條 件 】                          

2～ 30℃運(yùn)輸（30℃不超過(guò)6天）。

【實(shí)驗(yàn)器具】

1.試驗(yàn)應(yīng)使用潔凈且透明度好的試管。

2.試驗(yàn)使用的吸管或移液器吸頭使用前應(yīng)*清洗。

【樣本要求】

1.樣本的處理

應(yīng)采集空腹待檢者的血液不少于1mL，靜置或離心后采集血清。

2.樣本的儲(chǔ)存

血清樣品若在一周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)可儲(chǔ)存在 2～ 8℃條件下；若超過(guò)一周之后檢測(cè)應(yīng)將樣本儲(chǔ)存于 -20℃條件下，同時(shí)應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3.已知的干擾物：

① 患者治療期間，血清中藥物成分會(huì)造成部分血清樣本的凝集現(xiàn)象不明顯甚至出現(xiàn)假陰性，可選擇在療程間隔期進(jìn)行復(fù)檢樣本的血清學(xué)檢驗(yàn)。

② 出現(xiàn)明顯溶血、微生物污染的樣本不能用于檢測(cè)。

【檢驗(yàn)方法】

1. 反應(yīng)于室溫（18～ 25℃）條件下進(jìn)行，試驗(yàn)前將試劑、待檢樣本以及試管、吸管等用具應(yīng)置于室溫下平衡 30分鐘以上。

2. 試劑使用前應(yīng)充分搖勻。

3. 稀釋液：0.5%生理鹽水。

4. 稀釋抗原液：布氏桿菌病試管凝集試驗(yàn)抗原用稀釋液作1:10稀釋使用。

5. 準(zhǔn)備五支試驗(yàn)管（以做5個(gè)滴度為例），第1試管加入2.3ml生理鹽水，其余試管加入0.5ml生理鹽水。

6. 取0.2ml待檢血清加入第1試管2.3ml生理鹽水內(nèi)，混勻后取0.5ml加入第二試管做1:1稀釋?zhuān)诙嚬芑靹蚝笕?.5ml加入第三試管做1:1稀釋?zhuān)院蟾餮逑♂尮芤源祟?lèi)推，第1管內(nèi)應(yīng)棄去1.5ml剩余稀釋血清，后一管棄去0.5ml剩余稀釋血清，只留下0.5ml為試驗(yàn)用。

7. 將稀釋抗原液0.5ml分別加入以上各試驗(yàn)管，各管內(nèi)待檢血清分別稀釋為1:25,1:50,1:100,1:200,1:400。

8. 陰陽(yáng)對(duì)照試驗(yàn)管制備：將陰陽(yáng)對(duì)照血清按要求體積稀釋后，操作步驟參照5.6.7。

9. 比濁管制備：取稀釋抗原液1.25ml，再加入等量的稀釋液作倍比(1:1)稀釋?zhuān)瞥上♂尶乖篈(1:20), 再按下表配制比濁管：

++++：*凝集，上層液100％清亮；+++：幾乎*凝集，上層液75％清亮；++：顯著凝集，液體50％清亮；+：有微量凝集，液體25％清亮；-：無(wú)凝集，液體不清亮。

10. 孵育：將試驗(yàn)管，對(duì)照管及比濁管充分振蕩后置37℃±l℃溫箱中孵育20-22h，取出室溫靜置2小時(shí)，不需搖晃，以比濁管為標(biāo)準(zhǔn)判定結(jié)果。

【檢測(cè)結(jié)果的解釋】

根據(jù)各反應(yīng)管內(nèi)上層液體的清亮度判定結(jié)果。特別是50％清亮度(++)對(duì)判定結(jié)果關(guān)系較大，一定要與比濁管對(duì)比判定。待檢血清效價(jià)在1:100(++)及以上者或病程一年以上滴度1∶50（++）及以上者為陽(yáng)性。以出現(xiàn)“++"及以上凝集現(xiàn)象的gao血清稀釋度判斷為該血清的抗體滴度.對(duì)于檢出的陽(yáng)性病例在10天～ 14天后進(jìn)行復(fù)檢有利于更準(zhǔn)確進(jìn)行布魯氏菌病的診斷。

【診斷標(biāo)準(zhǔn)】： 布魯氏菌病診斷標(biāo)準(zhǔn)(WS268-2007)。

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】          

抗原凝集效價(jià)不低于1:1000（++）。

【檢驗(yàn)方法的局限性】                                                                              

1、本試劑檢測(cè)用樣本為人血清，在樣品保存、使用過(guò)程中，應(yīng)注意因樣本可能存在潛在病原微生物（乙型肝炎、丙型肝炎、梅毒及 HIV 病毒）等引起感染風(fēng)險(xiǎn)。

2、該試驗(yàn)作為單一的診斷方法是不完善的，凝集反應(yīng)陽(yáng)性時(shí)有診斷意義，由于有時(shí)會(huì)出現(xiàn)前帶及封閉現(xiàn)象即使凝集反應(yīng)陰性時(shí)也不能否定布魯氏菌病，應(yīng)與虎紅平板凝集實(shí)驗(yàn)（BPAT）、平板凝集實(shí)驗(yàn)（PAT）等結(jié)合使用。

3、該試驗(yàn)操作較麻煩、費(fèi)時(shí)、費(fèi)力，不適合于用作大規(guī)模的篩選檢測(cè)。另外該方法不能區(qū)分人工免疫和自然感染，并不是所有感染情形都出現(xiàn)具有診斷意義的抗體水平，單獨(dú)使用SAT時(shí)易造成誤診和漏診。

4、當(dāng)被檢測(cè)血清樣本中布魯氏菌抗體含量超過(guò)1000IU/mL時(shí)，試驗(yàn)會(huì)出現(xiàn)不同程度的前帶現(xiàn)象。

5、根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道及試驗(yàn)結(jié)果，布魯氏菌與腸炎耶爾辛氏O:9、大腸桿菌O:157、霍亂弧菌、土拉熱弗朗西斯菌存在共同抗原，注意在檢測(cè)過(guò)程中可能出現(xiàn)的交叉反應(yīng)，應(yīng)對(duì)此予以鑒別。

【注意事項(xiàng)】                                                                                      

1.嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，準(zhǔn)確加樣并保證試驗(yàn)的溫度條件，低溫條件下反應(yīng)的靈敏度會(huì)降低；按要求的時(shí)間及時(shí)觀察，以免影響結(jié)果的判定。建議每次檢測(cè)時(shí)進(jìn)行陽(yáng)性及陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)，只有在對(duì)照實(shí)驗(yàn)成立的前提下，檢測(cè)結(jié)果才有意義。

2.試劑使用完后立即擰緊瓶蓋，于 2～ 8℃下避光保存，嚴(yán)禁凍存。

3.試劑使用前應(yīng)充分搖勻；應(yīng)在有效期內(nèi)使用，若瓶?jī)?nèi)出現(xiàn)顆粒或搖振不散的凝塊時(shí)切勿使用。

4.試劑含有及其它腐蝕性化學(xué)成份，接觸或吞食對(duì)人體可造成危險(xiǎn)！一旦接觸到皮膚應(yīng)立即用大量的水進(jìn)行沖洗，必要時(shí)需到醫(yī)院就診。

5.試驗(yàn)過(guò)程中按照實(shí)驗(yàn)室規(guī)定采取必要的安全防護(hù)措施。

6.樣品、洗滌液、廢棄物和試驗(yàn)用具都視同有傳染性的物品，請(qǐng)遵循國(guó)家和地方的相應(yīng)法規(guī)和要求，采用安全和可接受的方法對(duì)所有材料進(jìn)行處理。

7.本品作為科研試劑，檢測(cè)結(jié)果僅用于科研學(xué)術(shù)交流，不能作為臨床診斷依據(jù)。